[저자] Yu-Zhong Zheng, Jiang-Tao Chen, Jian Li, Xian-Jing Wu, Jin-Zhou Wen, Xiang-Zhi Liu, Li-Yun Lin, Xue-Yan Liang, Hui-Ying Huang, Guang-Cai Zha, Pei-Kui Yang, Lie-Jun Li, Tian-Yu Zhong, Long Liu, Wei-Jia Cheng, Xiao-Nan Song, Min Lin
Background The emerging Coronavirus Disease-2019 (COVID-19) has challenged the public health globally. With the increasing requirement of detection for SARS-CoV-2 outside of the laboratory setting, a rapid and precise Point of Care Test (POCT) is urgently needed. Methods Targeting the nucleocapsid (N) gene of SARS-CoV-2, specific primers, and probes for reverse transcription recombinase-aided amplification coupled with lateral flow dipstick (RT-RAA/LFD) platform were designed. For specificity evaluation, it was tested with human coronaviruses, human influenza A virus, influenza B viruses, respiratory syncytial virus, and hepatitis B virus, respectively. For sensitivity assay, it was estimated by templates of recombinant plasmid and pseudovirus of SARS-CoV-2 RNA. For clinical assessment, 100 clinical samples (13 positive and 87 negatives for SARS-CoV-2) were tested via quantitative reverse transcription PCR (RT-qPCR) and RT-RAA/LFD, respectively. Results The limit of detection was 1 copies/μl in RT-RAA/LFD assay, which could be conducted within 30 min at 39°C, without any cross-reaction with other human coronaviruses and clinical respiratory pathogens. Compared with RT-qPCR, the established POCT assay offered 100% specificity and 100% sensitivity in the detection of clinical samples. Conclusion This work provides a convenient POCT tool for rapid screening, diagnosis, and monitoring of suspected patients in SARS-CoV-2 endemic areas.
All Keywords
【저자키워드】 severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, coronavirus disease-2019, lateral flow dipstick, point of care test, reverse-transcription recombinase-aided amplification, 【초록키워드】 COVID-19, coronavirus disease, viruses, public health, SARS-CoV-2, coronavirus, Influenza, Test, influenza A virus, Diagnosis, influenza A, Laboratory, lateral flow, amplification, clinical samples, sensitivity, specificity, RT-qPCR, pseudovirus, respiratory syncytial virus, nucleocapsid, limit of detection, POCT, Respiratory pathogens, hepatitis B, Pathogens, reverse transcription, SARS-CoV-2 RNA, respiratory, influenza B, reverse transcription PCR, Quantitative, platform, human coronaviruses, Hepatitis B virus, Endemic, clinical assessment, reaction, positive, Primers, suspected patients, targeting, probe, recombinant plasmid, human coronavirus, clinical sample, Result, tested, conducted, provide, offered, Point, suspected patient, was tested, 【제목키워드】 coronavirus, detection, Rapid, novel, Dipstick, Flow, Lateral,
배경 신종 코로나바이러스 감염증-2019(COVID-19)가 전 세계적으로 공중 보건에 도전장을 내밀고 있습니다. 실험실 외부에서 SARS-CoV-2에 대한 검출 요구 사항이 증가함에 따라 신속하고 정확한 POCT(Point of Care Test)가 시급히 필요합니다. 방법 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드(N) 유전자를 표적으로 하는 방법, 측면 유동 딥스틱(RT-RAA/LFD) 플랫폼과 결합된 역전사 재조합 효소 보조 증폭을 위한 특정 프라이머 및 프로브를 설계했습니다. 특이성 평가를 위해 인간 코로나바이러스, 인간 인플루엔자 A 바이러스, 인플루엔자 B 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스 및 B형 간염 바이러스에 각각 시험하였다. 민감도 분석을 위해 SARS-CoV-2 RNA의 재조합 플라스미드 및 슈도바이러스 주형으로 추정하였다. 임상 평가를 위해 100개의 임상 샘플(SARS-CoV-2에 대해 13개 양성 및 87개 음성)을 정량적 역전사 PCR(RT-qPCR) 및 RT-RAA/LFD를 통해 각각 테스트했습니다. 결과 다른 인간 코로나바이러스 및 임상 호흡기 병원체와의 교차 반응 없이 39°C에서 30분 이내에 수행할 수 있는 RT-RAA/LFD 분석에서 검출 한계는 1 copy/μl였습니다. RT-qPCR과 비교하여 확립된 POCT 분석은 임상 샘플 검출에서 100% 특이성과 100% 민감도를 제공했습니다. 결론 이 작업은 SARS-CoV-2 발병 지역에서 의심 환자의 신속한 선별, 진단 및 모니터링을 위한 편리한 POCT 도구를 제공합니다.